אם החלבון שלך אינו זהה לגודל הנוגדן שלך, אתה יכול לחסל עם 0.1M גליצין, pH2-3 ולאחר מכן להפריד את החלבון המעניין מהנוגדן באמצעות SEC (כמו superdex 200).
מה זה פולט חלבון?
החלבונים נפלטים על ידי שיפוע של כמויות הולכות וגדלות של ממס אורגני, כגון אצטוטריל. החלבונים נפלטים בהתאם להידרופוביות שלהם. לאחר טיהור ע י HPLC החלבון נמצא בתמיסה המכילה רק תרכובות נדיפות, וניתן בקלות להליאופל.
למה לחלבונים יש פליטת pH נמוכה?
השימוש במאגר pH נמוך לגלישה מחלבון A הוא ידוע כתורם לצבירה של המוצר עם זאת, סט מצומצם יותר של עדויות מצביע על כך ש-pH נמוך עשוי לא להיות הבלעדי סיבה להצטברות בכרומטוגרפיה של חלבון A, במקום זאת, היבטים אחרים של התהליך עשויים לתרום באופן משמעותי.
איך מתבצעת elution?
בכימיה אנליטית ואורגנית, elution הוא תהליך של חילוץ חומר אחד ממשנהו על ידי שטיפה עם ממס; כמו בשטיפת שרפים טעונים לחילופי יונים כדי להסיר יונים שנלכדו. … לאחר שמולקולות הממס עוזבות את האנליט, ניתן לבצע את האנליט מהעמודה לניתוח.
כמה נוגדנים אתה צריך עבור Coip?
עבור ניסויים שגרתיים Co-IP, הנוגדן שבו השתמשתי הוא לא יותר מ-2ug (בקבוצה שלי, 1.4 -2.0ug של נוגדן מספיק ללכידת 2500-5000ug של ליזאט חלבון.) אבל זה עדיין תלוי ברמות הביטוי של חלבוני היעד שלך בדגימות שלך, אז כנראה שאתה צריך לעשות כמה שינויים.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
