הנחיות להפשרת תאים
- הפשרה מהירה של תאים קפואים (< 1 דקה) באמבט מים של 37°C.
- דללו את התאים המופשרים באיטיות לפני שאתם מדגרים אותם, באמצעות מצע גידול שחומם מראש.
- צלח תאים מופשרים בצפיפות גבוהה כדי לייעל את ההתאוששות.
- השתמש תמיד בטכניקה אספטית נכונה ועבוד במנדף זרימה למינרית.
מדוע מתבצעת הפשרה של תאים?
חיוני להפשיר תאים בצורה נכונה כדי לשמור על הכדאיות של התרבות ולאפשר לתרבית להתאושש מהר יותר. חלק ממגנים מפני קריו, כגון DMSO, רעילים מעל 4 מעלות צלזיוס. לכן, חיוני שתרבויות יופשרו במהירות וידללו במצע תרבות כדי למזער את ההשפעות הרעילות.
מהו תהליך ההפשרה?
הפשרה היא תהליך של הוצאת מוצר קפוא מקפוא לטמפרטורה (בדרך כלל מעל 0°C) שבה אין שאריות קרח, כלומר "הפשרה". הפשרה נחשבת לעתים קרובות פשוט להיפוך של תהליך ההקפאה.
מהי הדרך הטובה ביותר להקפיא תאים?
הקפיא את התאים באיטיות על ידי הפחתת הטמפרטורה ב-1°C לערך לדקה באמצעות קפיא קריו בקצב מבוקר או מיכל הקפאה כמו "Mr. Frosty," זמין מ-Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). השתמש תמיד במדיום ההקפאה המומלץ.
איך מפשירים תא ראשי?
נגב את החלק החיצוני של בקבוקון התאים עם 70% אתנול או איזופרפנול. בארון בטיחות ביולוגי, סובב את המכסה רבע סיבוב כדי להקל על הלחץ הפנימי ולאחר מכן הדק מחדש. הפשר במהירות תאים באמבט מים של 37°C על ידי ערבוב עדין של הבקבוקון.הסר את הבקבוקון כאשר נותרה כמות קטנה של קרח.
