שמור אותם קר! תהליך יצירת התאים המוכשרים הוא מאתגר בשל הצורך של התאים להישאר קרים. זה חיוני מכיוון שהתאים כל כך רגישים ושבירים בזמן שהם נעשים מוכשרים שמירה על טמפרטורה נמוכה עוזרת למנוע מוות של תאים במהלך העיבוד.
מדוע התגובות נשמרות על קרח במהלך ניסוי הטרנספורמציה?
תערובת הפלסמיד-תאים מחוממת לזמן קצר ל-45-50 מעלות צלזיוס, ומאפשרת ל-DNA להיכנס לתא דרך הממברנה המשובשת. לאחר מכן התערובת המחוממת מונחת בחזרה על הקרח כדי לשמור את הפלסמידים בתוך החיידק … אם בתמיסת ה-DNA של הפלסמיד יש יותר מדי מלח, עלולה להתרחש קשתות, מה שפוגע בטרנספורמציה.
למה אתה מניח את הצינורות על קרח?
למה אתה חושב ששמנו את הצינורות על קרח? כדי להכניס את ה-DNA לתוך החיידק, עלינו לנעוץ בהם חורים עם הכימיקל סידן כלורי (CaCl2). … החורים שננעצו כדי לאפשר ל-DNA להיכנס מותירים את החיידק דולף. אם לא נשאיר אותם על הקרח, הם 'ידממו' למוות.
מה תפקידו של סידן כלורי קר כקרח בהכנת תאים מוכשרים?
תהליך של טרנספורמציה של הלם חום של סידן כלוריד מעודד תאי חיידק לקלוט DNA מהסביבה הסובבת. … תמיסת CaCl2 הקרה כקרח מקלה על קישור של DNA לפני השטח של התא, אשר חודר לתא לאחר תקופה קצרה של הלם חום (3).
איך מאחסנים תאים מוכשרים?
יש לאחסן תאים מוסמכים ב-- 80°C. אחסון ב-20°C יגרום לירידה משמעותית ביעילות הטרנספורמציה (TE). כאשר נבדקו על NEB 5-alpha Competent E. coli (NEB C2987H), התאים איבדו 94.5% מה-TE לאחר 24 שעות בלבד של אחסון ב-20°C.
