כדי להיות מסוגל לחלץ את הפיגמנטים מהכלורופלסטים תלויים במאגר בידוד. כדי שנוכל לחלץ את הפיגמנטים מהכלורופלסטים, עלינו להיפטר תחילה מהמאגר. מהי הדרך הטובה ביותר להפריד את הכלורופלסטים מהמאגר? השתמש בצנטריפוגה כדי להפריד את
איך מבודדים כלורופלסט?
בשיטת בידוד כלורופלסט, דופן התא נשברת באופן מכני באמצעות בלנדר או הומוגנייזר. לאחר מכן מסירים את רקמת העלים הבלתי נשברת והפסולת התאית על ידי סינון. הכלורופלסטים נאספים בצנטריפוגה באמצעות שיפוע פרקול.
איך יוצרים מאגר בידוד כלורופלסט?
הכן את הכמות הנדרשת של 1X חיץ בידוד כלורופלסט על ידי דילול מלאי המאגר 2X 1:1 עם מים dH2O הוסף 10 µL מתמיסת BSA 10% לכל מ"ל של 1X כלורופלסט מאגר בידוד. ממש לפני השימוש, הוסף 1 μL של DTT לכל 1 מ"ל של מאגר בידוד כלורופלסט. תייג מאגר זה כ'מאגר שלם'.
מה נמצא במאגר בידוד כלורופלסט?
חיץ בידוד DNA כלל 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA ו-1 mM DTT הליזה הכלורופלסט הושגה על ידי דגירה של גלולה של כלורופלסט עם 8 מ"ל של חיץ בידוד DNA, 1.5 מ"ל 20% SDS, 20 µl 2-Mercaptoethanol ו-30 µl Proteinase K (10 מ"ג/מ"ל) לתוך שפופרת צנטריפוגה ב-55°C למשך 4 שעות.
מהו ה-pH של המאגר המשמש להומוגנית עלה תרד בפרוטוקול בידוד כלורופלסט?
תרד עמוס בכלורופלסטים טובים והם מתבודדים בקלות. תצטרך לשים את העלים בבלנדר קר עם חיץ פוספט 0.1M, pH 7.5 ו-0.5 M סוכרוז כדי למנוע מהם להתפוצץ.
