Vortexing לא יגזוז את ה-RNA שלך כדי להפוך אותו לבלתי שמיש אם אתה עושה RT priming אקראי - רק אם אתה רוצה לשכפל mRNA ארוך. התמיכה הטכנית של Invitrogen נכונה גם כן. כלורופורם כבד יותר מטריזול וישקע לתחתית הצינור.
האם זה בטוח לעשות מערבולת RNA?
אל תערבב דגימות Trizol lysates או RNA כדי למנוע גזירה. לאחר החילוץ, שמור דגימות RNA על קרח בכל עת. פרוטוקול זה מיועד לדגימות שעברו 1 מ"ל של טריזול בצינור של 1.5 או 2 מ"ל.
האם אתה יכול לחמם RNA?
לכן, הימנע מטמפרטורות גבוהות ( מעל +65°C) מכיוון שהן משפיעות על שלמות ה-RNA. במקום זאת, כדי להמיס מבנים משניים, חממו RNA ל-65 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות בנוכחות חוצצים דנטורתיים.
איך משעים מחדש כדורי RNA?
השהה מחדש את הכדור עם מים חמים (40-50 מעלות צלזיוס). דגירה ב-45 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. שים אותם ב-+4 למשך 4-6 שעות.
איך מזרזים RNA?
A.
לאחר התאמה של ריכוז המלח, ניתן לזרז את ה-RNA על ידי הוספת 2.5 נפחים של אתנול או נפח אחד של איזופרופנול וערבוב יסודי, ולאחר מכן צינון למשך 15 דקות לפחות ב-20 מעלות צלזיוס.
